TRAVAUX DIRIGES DE CYTOLOGIE

Fractionnement cellulaire

Le fractionnement cellulaire se fait par centrifugation (Fig. 11) qui permet la séparation des éléments constitutifs d'un corps par la force centrifuge.

Fig 11. Les composants d'une centrifugeuse.InformationsInformations[1]

Méthode

  • L'appareil utilisé est une machine tournante à grande vitesse nommée centrifugeuse. Quand les vitesses de rotation sont très élevées on parlera d'ultracentrifugeuse (>15000 rpm (rotation par minute)).

  • Le fractionnement cellulaire peut se faire grâce à deux techniques différentes.

Fondamentala. Ultra Centrifugation Différentielle (UCD)

  • Elle permet la purification de l'homogénat en fonction de la taille et de la densité de ses constituants (macromolécules, organites etc...). Elle consiste à centrifuger l'homogénat à différentes vitesses. A chaque centrifugation, un organite sédimente pour former un culot. On récupère le surnageant et on le centrifuge à une vitesse plus grande ce qui va permettre la sédimentation d'un autre organite et ainsi de suite. (Fig. 12)

  • Dans l'ordre, les noyaux sédimentent en premier puis les mitochondries et les lysosomes et les peroxysomes puis les microsomes puis les ribosomes.

  • L'UCD offre, à côté de la simplicité de préparation, l'avantage de manipuler de grandes quantités d'homogénat. Cependant, elle ne permet pas d'obtenir des fractions pures.....( 5[2])

Fig 12. La centrifugation différentielle.InformationsInformations[3]

Fondamentalb. Ultra Centrifugation sur Gradient (UCG)

  • L'ultracentrifugation est également utilisée pour séparer les composants cellulaires sur la base de leur densité de flottaison qui fait appel à la poussée d'Archimède. Pour cela on prépare un gradient de densité en utilisant le plus souvent le sucrose. Les variations de densité sont obtenues en faisant varier la concentration de sucrose dans l'eau. L'homogénat est déposé sur le gradient puis centrifugé à l'ultracentrifugeuse. On obtient une séparation simultanée des différents constituants cellulaires en fonction de leur densité. Chaque molécule reste dans la phase qui correspond à sa densité, elle ne peut migrer dans une phase à densité supérieure. (Fig. 13)

  • L'UCG permet d'obtenir des fractions pures en une seule centrifugation mais seulement sur un volume d'homogénat très réduit (ce qui constitue un inconvénient majeur de cette technique)......( 5[2])

Fig13. La centrifugation sur gradient.InformationsInformations[4]
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  2. 5

    https://www.studocu.com/row/document/universite-badji-mokhtar-de-annaba/medecine/2022-2023-p1-methodes-d-etude-de-la-cellule-dr-ailane/74095075

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